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猪病诊断室 | 2016年第四季度猪蓝耳病病毒检测报告

郭海兵

2016年第四季度(9-11月),硕腾(中国)猪病诊断实验室共收到全国22个省市规模化猪场12137份样品(包括“瑞兰稳”实验猪场的样品,其分析数据另作报告),并对样品进行了猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病病毒(PPV)抗原及抗体检测。现将检测结果归纳总结如下,以期为规模化猪场的疾病防控提供参考。

本期跟养猪小伙伴分享的是来自107个猪场的8756份血清样品中PRRSV抗体及38个猪场的179份样品中PRRSV抗原检测结果。

1 材料与方法

1.1 样品来源及分布

样品形式为血清或病料,全部来自免疫背景清楚的规模化猪场,具体分布省份如图1、表1和表2。


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图1 样品分布(橙色区域代表样品来源省份)

表1 样品种类构成

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表2 样品来源地区及数量统计



省份

采样猪场数(个)

总样品数(份)

华北、东北地区

北京

3

28

天津

7

447

河北

13

610

辽宁

4

229

吉林

3

223

山西

1

6

黑龙江

2

176

小计


33

1719

华东地区

山东

9

695

安徽

6

556

江苏

6

487

福建

2

220

上海

4

860

浙江

23

1364

小计


50

4182

华中地区

河南

6

490

湖南

1

120

湖北

5

748

江西

13

1221

小计


25

2579

华南地区

广东

28

2199

广西

4

353

小计


32

2552

西南地区

四川

7

823

重庆

1

20

云南

3

262

小计


11

1105

总计


125

12137

1.2 样品生产阶段分布

样品按公猪、不同胎次经产母猪、不同周龄商品猪以及后备公、母猪等不同生产阶段随机采取。

1.3 试剂及检测方法

PRRSV抗体ELISA检测试剂盒购自美国IDEXX,抗原检测相关试剂盒购自北京全式金公司,所有操作均严格按照试剂盒说明书进行。

2 结果与分析

2.1 PRRSV抗体

针对PRRSV抗体,本季度共检测了107个猪场的8756份血清样品,PRRSV抗体阳性猪场比例达到100.00%,样品PRRSV抗体总阳性率为83.40%。

从区域角度分析,除西南地区的样本阳性率低于70.00%外,其它区域阳性样本数占比均为80.00%左右,其中华北、东北地区最高(84.30%),见图1。

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图1 各地区检测猪场数及总体的PRRSV抗体阳性率

我们根据猪场的不同生产阶段,统计了不同猪群PRRSV抗体阳性率,样品按公猪、后备母猪、经产母猪以及不同周龄商品猪(2周、4周、6周、8周、10周、14周、20周)进行统计,各阶段猪群的PRRSV抗体阳性率见图2。

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图2 不同生产阶段猪群PRRSV抗体阳性率

从图2可看出,种猪群中后备母猪的阳性率最高,其次是经产母猪,公猪阳性率最低。对于商品猪而言,2~6周龄时,PRRSV抗体阳性率持续降低,6周龄后又逐渐升高,14周龄后阳性率稳定在90%以上。

另外,我们把检测猪场分为PRRSV疫苗免疫场和未免场,两者的PRRSV抗体阳性率如图3。

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图3 PRRSV疫苗免疫与未免场数量及其抗体阳性率

从图3可看出,免疫PRRSV疫苗猪场的PRRSV抗体阳性率(84.00%)明显高于未免疫猪场的抗体阳性率(54.00%)。

我们又进一步将免疫PRRSV疫苗的猪场分为免疫经典毒株(VR-2332、CH-1R、R98)疫苗场和免疫缺失毒株(变异株)(JXA1-R、TJM-F92)疫苗场,两者的PRRSV抗体阳性率如图4。

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图4 免疫PRRSV经典毒株和变异毒株疫苗猪场数量及其抗体阳性率

从图4可看出,在免疫PRRSV疫苗的猪场中,免疫变异毒株疫苗的猪场数量是免疫经典毒株疫苗近两倍,但两者的PRRSV抗体阳性率接近。

2.2 PRRSV抗原

为确保能够检测到PRRSV抗原,我们对每个样品分别检测PRRSV的ORF7基因和Nsp2基因。ORF7基因最为保守,通过检测可以判定样品中是否含有PRRSV,但不能鉴别其是高致病性毒株(缺失株)还是经典毒株。因为缺失株的Nsp2基因在经典株基因的基础上缺失了90个核苷酸,所以根据Nsp2基因高变区扩增片段的大小,可以鉴别缺失株与经典株核酸。

我们共检测了38个猪场的179份样品,其中ORF7阳性样品数为61份,PRRSV ORF7阳性率为34.1%,Nsp2阳性样品数为3份,PRRSV Nsp2阳性率为1.7%,PRRSV抗原总阳性率(包含ORF7和Nsp2)为35.6%(图5)。

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图5 PRRSV ORF7和Nsp2阳性样品数及阳性率

进一步分析,将检测猪场分为PRRSV疫苗免疫场和未免疫场,PRRSV抗原阳性率如图6。将免疫PRRSV疫苗场又进一步分为免疫经典毒株(VR-2332、CH-1R、R98)疫苗场和免疫缺失毒株(JXA1-R、TJM-F92)疫苗场,两者的PRRSV抗原阳性率如图7。

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图6 PRRSV疫苗免疫场与未免疫场的抗原阳性率

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图7 免疫PRRSV经典毒株与缺失毒株疫苗场的抗原阳性率

从以上两图可看出,免疫猪场PRRSV ORF7基因和Nsp2基因阳性检出率(分别为36.1%与1.93%)均高于未免猪场(分别为2.1%与0.0%)。免疫缺失毒株疫苗猪场与免疫经典毒株疫苗猪场相比,其ORF7基因阳性率相差不大,而Nsp2的阳性率(1.6%)明显低于免疫经典毒株疫苗猪场(3.8%)。

我们在检测PRRSV ORF7基因和Nsp2基因时,同时检测了CSFV、PRV、PCV2的抗原,并统计了PRRSV与其他病原检出率,结果见图8。

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图8 PRRSV与其它病原检出率统计

PRRSV和PCV2都能引起感染猪免疫抑制。从上图可看出,PRRSV与PCV2的检出率最高,提示PRRSV与PCV2之间存在着密切联系。

3 讨论

第四季度,检测抗体的猪场107个,其中免疫PRRSV变异株疫苗的63个(免疫经典毒株33个,未免猪场11个),而且大部分是TJM-F92株;检测抗原的猪场38个,其中免疫变异株疫苗的28个(免疫经典株5个,未免猪场5个)。从此看来,目前国内仍然以免疫PRRSV变异株疫苗的为主,这与近年来国内主要流行PRRSV变异毒株有关。

无论是从抗体阳性率还是抗原检出率来看,猪群普遍存在PRRSV感染现象;PRRSV抗体猪场阳性率达到100.00%,PRRSV抗体样品总阳性率为83.40%,比第三季度(80.70%)略微偏高;抗原阳性样品占比为35.60%,较第三季度(66.67%)大幅度降低。一方面,可能与本季度检测的正常血清样品较多有关;另外一方面,也可能因为PRRSV变异株普遍免疫导致猪群感染压力减小,PRRSV感染率降低。

从不同生产阶段猪群的统计结果来看,PRRSV抗体在种猪群和商品猪群上呈现出了一定的规律性。从种猪群来看,后备母猪的阳性率最高(88.00%),其次是经产母猪和生产公猪。大部分猪场在育肥中后期有PRRSV感染的过程,导致后备母猪的PRRSV阳性率最高,而部分猪场公猪不免疫疫苗,这可能是其PRRSV抗体阳性率较低的原因。从商品猪群来看,6周龄前PRRSV抗体阳性率不断下降,6周龄以后PRRSV抗体阳性率又逐步上升,这或许能协助我们判断猪群的PRRSV活跃阶段。临床上,可以采集4周龄至12周龄猪的血清样本,检测其PRRSV抗体与抗原;同时,结合猪场临床情况进而推测PRRSV在保育猪群的活跃时间点。

从不同免疫状况猪场的结果来看,免疫PRRSV疫苗猪场的抗体阳性率(84.00%)明显高于未免猪场(54%)。未免疫猪群的PRRSV抗体应该主要是由野毒感染产生的。所以,不能掉以轻心。另外,从ORF7和Nsp2基因检测率(检测出均为缺失毒株)来看,免疫猪场的样本阳性率(36.10%和1.93%)都要比未免猪场的(2.1%和0.00%)高,这可能是样本中检出疫苗毒株导致的,也可能和未免疫场样品数量过少有关。另外,从ORF7基因的样本检出率来看,免疫缺失毒株疫苗猪场的样本阳性率(35.70%)要比免疫经典毒株疫苗猪场的(38.50%)稍低;而Nsp2的阳性率(1.60%)明显低于免疫经典毒株疫苗猪场(3.80%),这可能印证了PRRSV经典株疫苗免疫对于变异株保护不够,所以导致PRRSV变异株野毒感染活跃。

4 结论

从本季度的检测结果来看,猪群普遍存在PRRSV感染现象,且在保育中期(6周龄左右)、保育后期(10周龄左右)以及育肥前期(14周龄左右)这3个阶段易活跃。另外,从抗原来看,目前仍然还是以PRRSV和PCV2为主要检出病原。这或许预示着PRRSV和PCV2在检测的几种病原中占着主导作用。虽然在抗原检测过程中,检测出病原的核酸不一定代表的是病毒感染,但是,对生产具有很重要的指导意义。

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