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关于伪狂犬病毒的几个误区——gB、gE抗体与中和抗体的来龙去脉

姚晶

随着我国养殖水平与养殖技术人员素质的不断提高,在疾病诊断方面,越来越多的动保企业、饲料企业以及养殖公司(户)开始重视实验室检测这一诊断工具。很多人对实验室的检测结果都具备一定的分析能力,但是,笔者在服务过程中发现有一些人经常会误读检测结果,误读的结果进一步误导养殖者做出错误的决定。其中,针对伪狂犬病毒(PRV)抗体的解读就存在几个典型的误区。

在解释这几个误区前,笔者简单介绍下伪狂犬病毒常见的三种抗体:抗糖蛋白gB抗体、抗糖蛋白gE抗体以及中和抗体。

PRV不同毒株的毒力千差万别。毒力不同致使疾病的严重程度、带毒时间长短、带毒量以及组织嗜性不同。PRV受多基因的控制,这些基因单个或多个缺失可使PRV毒力减弱。与毒力相关的病毒蛋白包括病毒囊膜糖蛋白、病毒编码的酶以及非必需的衣壳相关蛋白。根据糖蛋白在细胞培养液病毒复制中的不同作用,将其分为非必需糖蛋白(gC、gE、gG、gI、gM以及gN)和必需糖蛋白(gB、gD、gH、gK以及gL)。在病毒毒力方面,糖蛋白主要是介导PRV黏附至靶细胞。表1列出了一些糖蛋白的功能。

表1 PRV糖蛋白的特性

名称

必需糖蛋白

黏附

穿透力

神经扩展性

gB

-

+

+

gC

[+]

-

-

gD

[+]

+

-

gE

-

-

[+]

注:“+”表示有重要功能,“[+]”表示有非必需功能或调节功能。

由病毒的糖蛋白gB和gE刺激机体的免疫系统产生相应的抗体,抗体分别为抗gB抗体与抗gE抗体(以下分别简称为“gB抗体”、“gE抗体”)。

在PRV入侵三叉神经和嗅神经通路上,糖蛋白gE是一个关键性的蛋白质。PRV gE基因的缺失可以显著降低病毒的毒力,使得神经元细胞感染受到限制,所以活疫苗一般都是缺失gE基因。既然PRV缺失gE基因,那么由此活疫苗复制出来的疫苗毒株不含糖蛋白gE,进而在体内无法刺激机体产生相应的gE抗体。

凡能与病毒结合,使其失去感染力的抗体称为中和抗体。病毒可以刺激机体产生中和抗体,而中和抗体又与病毒结合后使病毒失去吸附细胞的能力,从而丧失感染力;病毒与其特异性的中和抗体相遇之后发生的作用,类似于化学中的相应酸碱相遇之后发生的中和反应,所以称这种作用为中和作用。而根据抗体能否中和病毒的感染性而建立的免疫学试验称为中和试验。

知道了gB抗体、gE抗体以及中和抗体是什么之后,笔者向读者提出几个问题:

1 猪体内的gB抗体一定代表的是疫苗免疫产生的抗体吗?

这个问题的答案是:不一定。或者笔者换个问法:既然疫苗毒株感染猪可以产生gB抗体,那么野毒毒株感染猪是不是也可以产生gB抗体?答案是肯定的。

因为如表1所示囊膜糖蛋白gB是PRV复制必需的糖蛋白,所以作为活疫苗或者野毒株都存在囊膜糖蛋白gB,因此不管是活疫苗免疫接种还是野毒感染都会刺激机体产生gB抗体。当猪群是伪狂犬野毒阳性猪群时,其体内的gB抗体很可能是由疫苗免疫产生的gB抗体和野毒感染产生的gB抗体共同组成。只有在排除野毒感染的情况下,gB抗体才代表的是疫苗免疫产生的抗体。

此时,请读者问下自己是否曾经浪费钱对伪狂犬野毒阳性猪群检测过gB抗体呢?如果非要检测,那请先确定猪群或猪无伪狂野毒感染,也即先确定样品的gE抗体检测结果为阴性时,才检测gB抗体。

2 猪体内存在gE抗体是否就表示该猪存在野毒感染?

很多人在解读检测结果时,只要看到gE抗体,就把其看成伪狂犬野毒感染,其实这种判读是片面的。当然gE抗体一定是野毒感染产生的抗体(免疫的疫苗是gE基因缺失疫苗),这一点没错。但是我们往往会忽略一种情况:当母猪感染野毒后产生的gE抗体同样可以通过母乳传递给哺乳仔猪,而且母源gE抗体比较强,经常可以延续到10~14周龄左右。经常会有人拿到检测报告来问笔者,怎么产房仔猪、保育猪野毒感染这么严重?

同样,请问读者当明明知道猪场是伪狂犬野毒阳性场时,是否还在浪费钱检测产房仔猪或者保育前期仔猪的gE抗体呢?一般来说,此时检测商品猪gE抗体的主要目的是看gE抗体在商品猪的转阳时间或者育肥猪是否转为阴性。因此,笔者建议一般采取10周龄之后猪群的血样进行检测,如10周龄、14周龄、18周龄、22周龄、26周龄商品猪的血样。

3 猪体内的gB抗体水平高低能否完全代表疫苗的保护效果好坏?在体液免疫方面,猪只的免疫保护靠什么抗体?

PRV的一系列糖蛋白、非糖蛋白和结构蛋白的抗体都可以抑制病毒在体内或体外的复制,但是它们起到的作用程度不一。

《猪病学》第九版中的研究表明针对gC和gD的补体依赖性病毒中和抗体是最有效的。因为,gC抗体具有抑制病毒在靶细胞上黏附的作用,而gD抗体具有抑制病毒穿入的作用,从而阻断了感染的第一阶段;在恢复期,抑制病毒复制的主要抗体是针对gC的抗体。gB抗体也可以促进猪的免疫保护作用。

另外,2013年4~6月,浙江省农业科学院畜牧兽医研究所在研究不同品牌疫苗诱导流行毒株中和抗体能力的同时,研究了gB抗体与流行毒中和抗体的关系。其中就存在诱导gB抗体最好的试验组诱导的中和抗体很不好的现象。这似乎说明gB抗体和目前流行毒株的中和抗体相关性不强。

而正如前文提到的中和抗体是能够与病毒结合,使其失去感染力的抗体。这是最直接的抑制病毒复制的重要途径。当然中和抗体不是依靠某个抗体决定的,它是由多个抗体共同作用的结果(如上文提到的gC抗体和gD抗体等)。衡量中和抗体水平高低的一个方法即是中和试验,通过中和试验可以测出血清中和病毒的中和效价,效价越高说明中和病毒的能力越强。

4 只要是进口PRV疫苗,效果都差不多?

疫苗效果的好与坏,不是靠感觉而是靠评估方法来客观评估的,其中常用的一个评估疫苗产生中和抗体效价的方法是中和试验,通过中和试验就可以客观地评价疫苗产生的抗体中和病毒的能力。广东源丰农业有限公司(国家生猪核心育种场,伪狂犬病毒阴性场)为了客观评估不同进口疫苗产生的抗体对流行毒株的中和能力而进行了中和试验。具体试验如下:

2014年,广东源丰农业有限公司选择了4种著名的、不同品牌的进口PRV疫苗,分别做了母猪试验和生长猪试验。该场共约有5000头基础母猪,分多条生产线饲养。

母猪试验:一条线免疫P苗、一条线免疫F苗、其余免疫M苗(M、F为Bartha-K61毒株,P为Bucharest株)。分组免疫后6个月,从三组分别随机抽取10头、10头、14头母猪的血清用PRV流行毒株(HuBei株)做中和试验,结果见表2。为了更直观地表示抗体水平的高低,本试验用能够中和病毒的最高血清稀释倍数来表示样品的中和抗体水平,例如,血清抗体值为“8”,则表示该血清的中和抗体效价为1:8。

表2 M、P、F苗试验组母猪免疫疫苗6个月后的中和试验结果

M苗免疫组

P苗免疫组

F苗免疫组

抗体值

数量

抗体值

数量

抗体值

数量

32

1

64

1

256

2

16

1

16

5

64

5

8

3

8

3

32

2

4

4

4

1

16

3

2

1



8

2

2-4倍:50%

8-16倍:40%

32-64倍:10%

几何平均值:6.5

2-4倍:10%

8-16倍:80%

32-64倍:10%

几何平均值:13

8-16倍:35.7%

32-64倍:50%

128-256倍:14.3%

几何平均值:39

生长猪试验:试验分为4组,每组10头猪,分别免疫M、P、B、F等不同品牌的PRV疫苗(M、P、F同母猪试验疫苗,B为另一个Bartha-K61毒株进口疫苗);免疫程序为11周龄和15周龄两次免疫,15周龄免疫后收集血清用PRV流行毒株(HuBei株)做血清中和试验,结果见表3。

表3 各试验组生长猪免疫2次疫苗后5周的中和试验结果

M苗免疫组

P苗免疫组

B苗免疫组

F苗免疫组

抗体值

数量

抗体值

数量

抗体值

数量

抗体值

数量

8

1

4

2

16

1

8

1

4

1

0

8

8

1

4

2

2

1



2

1

2

5

0

7



0

7

0

2

30%有中和抗体

几何平均值:1.52

20%有中和抗体

几何平均值:1.32

30%有中和抗体

几何平均值:1.74

80%有中和抗体

几何平均值:2.30

由表2、表3可知,无论是在母猪试验还是在生长猪试验中,不同品牌的PRV疫苗(M、B、F苗为同为Bartha-K61毒株)免疫诱导猪只产生的流行毒中和抗体水平差异显著。

总之,首先要知道gB抗体、gE抗体以及中和抗体是怎么来的;其次,我们也要清楚只有在排除伪狂野毒感染的情况下检测gB抗体才具有指示疫苗抗体产生的意义;再次,我们要知道哺乳仔猪也可以从母猪获得母源gE抗体,并可延续至保育阶段;第四,评估疫苗的体液免疫效果就看针对当前流行毒株中和抗体的效价,单凭gB抗体水平高低来评估疫苗效果好坏太片面;最后,虽然是同一个毒株的PRV进口疫苗,但是不同品牌疫苗的中和效价差距很显著。

认清这四个误区不仅能帮助读者准确地解读检测结果,从而做出正确的决定,而且还能帮助读者正确判断哪些检测是有意义的,从而不再花冤枉钱做没有必要的检测。

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